荧光抗体的制备有哪些要求呢？快来跟着小编了解一下吧！

（一）抗体要求

将荧光素与特异性抗体以化学共价键的方式结合而成。一般需经纯化提取IgG后再作标记。

（二）荧光素要求　异硫氰酸荧光素最常用

要求：

①应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基团，与蛋白质结合后不易解离，而未结合的色素及其降解产物易于清除；

②荧光效率高，与蛋白质结合后，仍能保持较高的荧光效率；

③荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明；

④与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质；

⑤标记方法简单、安全无毒；

⑥与蛋白质的结合物稳定，易于保存。

（三）抗体的荧光素标记

1.搅拌法：适用于标记体积较大、蛋白含量较高的抗体溶液。优点是标记时间短、荧光素用量少。但易引起较强的非特异性荧光染色。

2.透析法：适用于标记样品量少、蛋白含量低的抗体溶液。此法标记比较均匀，非特异染色也较低。

（四）荧光素标记抗体的纯化

抗体标记完成后，还应对标记抗体作进一步纯化，以去除未结合的游离的荧光素。

纯化方法可采用透析法或层析分离法。

（五）荧光抗体的鉴定

1.荧光素与蛋白质的结合比率　荧光素与蛋白的过量结合是非特异荧光着色的来源之一，而未结合者有抑制特异性荧光抗体反应的作用。

荧光素结合到蛋白上的量的重要指标是荧光素与蛋白质的结合比率（F/P）。比值越大，则抗体结合的荧光素越多，反之则结合越少。一般用于组织切片的荧光抗体，其F/P＝1.5为宜，用于活细胞染色F/P＝2.4为宜。

2.抗体效价　可以采用双向免疫扩散试验测定，抗原含量为1g/L时，抗体效价＞1:16者较为理想。

3.抗体特异性①吸收试验：向荧光抗体中加入过量相应抗原反应后，再用于阳性标本染色，应不出现明显荧光；②抑制试验：阳性标本先与相应未标记抗体反应，洗涤后，再加荧光抗体染色，荧光强度应受到明显抑制。

（六）荧光抗体的保存

防止抗体失活和防止荧光淬灭。

小量分装，-20℃冻存可保存2～3年。

真空干燥后可长期保存。

稀释后的抗体不宜长时间保存，在4℃可保存1～3天。

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