放射性标记物制备及鉴定,快来跟着小编了解一下吧!
(一)原理:以放射性碘原子置换被标记物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。蛋白质、肽类等含有上述基团,可用125Ⅰ直接标记,不含上述基团的甾体激素或药物分子,须连接相应基团才能用于放射性碘标记。
(二)标记及类型
1.直接标记法:肽类、蛋白质和酶的碘化标记。常用的方法为:①氯胺 T(ch-T)法;②乳过氧化物酶标记法。
2.间接标记法:也称连接标记法,是最常用的间接碘标记方法。该法主用于甾体类化合物、环核苷酸、前列腺素等缺乏碘标记基团的小分子化合物的标记。
(三)放射标记物的纯化
1.凝胶过滤法:分子筛机制。
2.离子交换层析法:游离125Ⅰ与标记物分子极性差异进行吸附解离。
3.聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE):按分子所带电荷和直径不同在电场作用下分子迁移速率不同。
4.高效液相色谱法。
(四)放射标记的鉴定
1.放射化学纯度:单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总放射性的百分率,要求>95%。该参数还是观察在贮存期内标记物脱碘程度的重要指标。
2.免疫活性:制备的标记物与抗体结合的能力。
3.比放射活性:单位化学量标记物中所含的放射性强度,即每分子被标记物平均所结合放射性原子数目。
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