单向扩散试验是什么呢?快来跟着小编了解一下吧!
在琼脂内混入抗体,待测抗原从局部向琼脂内自由扩散,如抗原和相应抗体结合,则形成沉淀环。
(一)试管法 将一定量的抗体混入0.7%琼脂糖溶液中,注入小试管内,上层加抗原溶液,使其自由扩散,在抗原抗体比例恰当位置形成沉淀环。
(二)平板法 是将抗体或抗血清混入0.9%琼脂糖凝胶内,制成平板,在上打孔,将抗原加入孔中,37℃行自由扩散,24~48小时后可见孔周围出现沉淀环,测定环的直径或面积计算标本中待测抗原的浓度。有两种计算方法:
1.Mancini曲线 适用大分子抗原和长时间扩散(>48小时)的结果,沉淀环直径的平方(d2)与抗原浓度(c)呈线性关系:c/d2=k。
2.Fahey曲线 适用于小分子抗原和较短时间扩散的结果处理,用半对数纸画线,浓度对数logc与扩散环直径(d)呈线性关系:logc/d=k(其中c为抗原浓度,d为沉淀环直径,k为常数)。
(三)影响因素
1.抗血清必须特异性强、效价高、亲和力强,在良好条件下保存。
2.每次测定都必须作标准曲线。
3.每次测定时必须用质控血清作质控。
4.注意双环现象(出现了两种抗原性相同成分)。
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