
生物素-亲和素系统是一种高灵敏度的信号放大技术,广泛应用于多种免疫检验技术中。它主要利用了生物素与亲和素之间极强的结合力,这种结合力比抗原抗体之间的结合力要强得多。在临床免疫学和免疫检验领域,生物素-亲和素系统可以用于以下几个方面:
1.酶联免疫吸附试验(ELISA):在ELISA中,生物素化的抗体或抗原与固相载体上的待测物相结合后,加入亲和素标记的酶,通过底物显色来检测目标物质的存在。这种方法不仅提高了灵敏度,还能减少非特异性结合。
2.化学发光免疫分析(CLIA):在化学发光免疫测定中,可以使用生物素-亲和素系统进行信号放大,提高检测限。例如,将待测抗原或抗体先与生物素化的探针结合,再加入亲和素标记的发光剂,通过测量光强度来定量目标物质。
3.免疫印迹技术(Western Blot):在免疫印迹中,可以通过使用生物素化的一级或二级抗体,并配合HRP-亲和素复合物进行显色反应,以增强检测信号,使低丰度蛋白的检测成为可能。
4.流式细胞术(Flow Cytometry):在流式细胞分析时,可以利用生物素化的特异性抗体标记目标细胞表面或内部抗原,再与荧光素标记的亲和素结合,从而实现对特定细胞群体的精准识别和定量分析。
5.免疫组织化学染色(Immunohistochemistry, IHC):在IHC中应用生物素-亲和素系统能够显著提高检测灵敏度。通常先用生物素化的抗体与目标抗原结合,然后加入链霉亲和素标记的酶或荧光探针进行显色。
6.免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP):在IP实验中也可以采用该系统来捕获特定蛋白质复合物。通过将目标蛋白与生物素化的抗体共同孵育,再加入链霉亲和素包被的磁珠或微球,可以有效地从复杂的样品中分离出目的蛋白。
总之,生物素-亲和素系统的应用极大地提高了免疫检验技术的灵敏度、特异性和准确性,在临床诊断