酶活力测定的影响因素是什么呢?跟着小编来学习一下吧!
影响酶活性的因素包括底物的浓度、酶浓度、酶反应的最适pH、最适温度、酶的激活剂、抑制作用,另外还包括试剂中表面活性剂的作用等因素。
1.反应速度:大多数酶促反应是可逆反应,其速度既受底物浓度的影响,也受产物生成量的影响。酶反应动力学中所指速度是反应的初速度。
当底物浓度较高时,在反应的初期,其浓度变化甚微,产物生成量也很少,此时反应速度可看作是恒定的。
2.底物浓度:
米氏方程是反映酶促反应速度与底物浓度关系
[S]:底物浓度。
ν:不同[S]时的反应速度。
νmax:最大反应速度。
Km:米氏常数。
Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。
Km值是酶的特征常数之一,只与酶的性质有关,而与酶浓度无关。
不同的酶,Km值不同。同一个酶有几种底物时,则对每一种底物各有一特定的Km值,其中Km值最小的底物一般称为该酶的最适底物或天然底物。
3.测定酶活力时需注意
(1)酶促反应过程中,要用初速度表示酶促反应速度。
(2)要规定时间、温度、pH等反应条件,并在酶测定过程中保持这些反应条件的恒定。
(3)配制的底物浓度应准确且足够大,底物液中应加入不抑制该酶活力的防腐剂并保存于冰箱中,以防止底物被分解。
(4)标本要新鲜,应保存于冰箱中。用血浆时,应考虑到抗凝剂对酶反应的影响。在采血、分离血清时,应注意防止溶血和白细胞的破裂。
(5)在测定过程中,所用仪器应绝对清洁,不应含有酶的抑制物,如酸、碱及蛋白沉淀剂等。
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