网织细胞计数的操作方法,快来跟着小编了解一下吧!
1.显微镜试管法操作
(1)加染液:于试管中加入10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液2滴,再加新鲜血2滴,立即混匀,置37℃下15~20min。
(2)制片:取1小滴制成薄血涂片,自然干燥。
(3)观察:在低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位进行观察。
(4)计数:在油镜下计数至少1000个红细胞中网织红细胞数。
(5)计算:
网织红细胞分数=(计数的网织红细胞数)/1O00,
网织红细胞绝对值(×109/L)=红细胞数×1012/L×网织红细胞分数。
2.显微镜法注意事项
(1)网织红细胞必须活体染色,WH0推荐使用新亚甲蓝染液,其染色力强且稳定。煌焦油蓝染液操作简单、费用低廉,但易产生沉淀、工作效率不高、精度差。染液与血液比例以1:1为宜,严重贫血时,可适量增加血量。
(2)为提高网织红细胞计数精度和速度,ICSH推荐使用Miller窥盘,方法是将Miller窥盘置于目镜内,选择红细胞散在且分布均匀的部位。
(3)用小方格(A)计数红细胞,大方格(B)计数网织红细胞,按下式计算:
(4)注意鉴别网织红细胞与HbH包涵体。Ret为蓝绿色网状或点粒状物质,分布不均,HbH包涵体为蓝绿色圆形小体,均匀散布于整个红细胞内。
【方法学评价】
1.普通光学显微镜法
试管法操作简便、重复性较好。玻片法取血量少、染色时水分易蒸发,造成结果偏低。但显微镜法受主观因素影响较多,且耗时费力。
2.网织细胞计数仪法
可客观地将Ret分成高荧光强度网织红细胞(HFR)、中荧光强度网织红细胞(MFR)、低荧光强度网织红细胞(LFR)3类,有助于化疗、放疗、移植患者的监测。
3.血液分析仪法
网织红细胞绝对值(Ret)、网织红细胞百分比(Ret%)、网织红细胞分布宽度(RDWr)、网织红细胞平均体积(MCVr/MRV)、网织红细胞血红蛋白浓度(HCr)、网织红细胞平均血红蛋白浓度(MCHCr)、网织红细胞血红蛋白分布宽度(HDWr)、LFR、MFR、HFR、网织红细胞成熟指数(RMI,RMI=(MFR+HFR)/LFR×100)。
仪器法优点是测量细胞多,避免主观因素,方法易于标准化。
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