氰化高铁血红蛋白测定法操作如何进行呢？快来跟着小编了解一下吧！

（1）直接测定法

①加转化液：试管内加5ml　HiCN转化液

②采血与转化：取全血20μl，加到盛有转化液的试管底部，用上清液反复冲洗吸管3次，充分混合，静置5min。

③测定：以符合WH0标准的分光光度计，波长540nm处，光径（比色杯内径）1.000cm，HiCN转化液或蒸馏水调零，测定吸光度（A）。

④计算：根据样本的吸光度（A）直接计算出血红蛋白浓度（g/L）

（A为测定管吸光度，44为毫摩尔消光系数，64458/1000为1mol/L Hb溶液中所含Hb克数，251为稀释倍数。）

（2）HiCN标准液比色法测定

HiCN参考液（50g/L、100g/L、150g/L、200g/L），分别测得540nm处的吸光度，以参考液血红蛋白含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线或求出K值。

①标准曲线绘制和K值计算

②样本吸光度（A）

③通过标准曲线查出样本血红蛋白浓度，或用K值计算，血红蛋白浓度Hb（g/L）＝K×A。

注意事项

（1）标本：异常血浆蛋白质、高脂血症、白细胞数超过30×109/L、脂滴等可产生浊度，干扰Hb测定。

（2）HiCN转化液是一种低离子强度、pH近中性的溶液（7.2±0.2）。样本中白细胞过高或球蛋白异常增高时，HiCN比色液会出现浑浊。

（3）HiCN贮存：转化液贮存在棕色有塞玻璃瓶中，不能贮存在塑料瓶中，否则会使CN-丢失，测定结果偏低。HiCN转化液在4℃保存一般可数月，不能在0℃以下保存，因为结冰可使高铁氰化钾还原，试剂失效。

（4）氰化钾试剂是剧毒品，测定后的废液应收集于广口容器中，首先以水稀释废液（1:1），再按每升上述稀释液加次氯酸钠35ml，充分混匀，敞开容器，放置15h以上，使CN-氧化成C02和N2挥发，或水解成C032-和NH4＋，再排入下水道。废液不能直接与酸性溶液混合，因为氰化钾遇酸可产生剧毒的氰氢酸气体。

2.十二烷基硫酸钠血红蛋白SDS测定法：

具有操作简单、呈色稳定、准确性和精确性符合要求、无公害等优点。但由于摩尔消光系数尚未最后确认，不能直接用吸光度计算Hb浓度，而且SDS试剂本身质量差异较大，会影响检测结果。

3.HiN3最大吸收峰542nm，显色快，结果稳定。

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