请教！
你好，请问你用serum-free，同时也是feeder-free吗？用的是kouck－out血清替代物吗？还是别的啊？我试过用无饲养层的血清培养，形成的克隆一晃就漂起来，好像EB,很是烦恼，另外要是没有用kouck－out血清，用的是YING的培养系统吗？
是的。我之前做feeder-free的低血清培养（1%FBS），细心操作的话细胞飘起来的情况很好控制，比起serum-free贴壁也很快，1小时之内大部分细胞都能贴。
再多问一下，我用的是dish操作，然后用明胶包被，接种ESC后，形成克隆团2天，很小心的拿出来后就有好多细胞团漂起来了，贴壁不是很好啊，不知道您是怎么操作的，可以指点一下吗？对了，你做无血清时用的ying的方法吗？
这个就不清楚了，我们也是一般操作，轻拿轻放。
我看了一下，medium成分和Ying的方法差不多
medium is not important..
that is fine
But what they described in methods was about medium reconstitution mainly.
Tricky stuff is not available from paper...
serum_free wrote:
But what they described in methods was about medium reconstitution mainly.
Tricky stuff is not available from paper...
yeah,
I can not tell you the tricky stuff....at least yet
nanog前辈可以告诉我怎么样才能使用N2B27培养基无饲养层培养好ESC，我已经失败好多次，快要崩溃了～
hanfuzjfc wrote:
nanog前辈可以告诉我怎么样才能使用N2B27培养基无饲养层培养好ESC，我已经失败好多次，快要崩溃了～
what is your problem?
describe it in details
先用经典的血清培养ESC在MEF上形成克隆后消化离心用ying的无血清培养基N2B27重悬浮，先接种到没有明胶包被的dish上，培养1小时，目的去处MEF，之后将未贴壁的ESC转移到明胶包被的dish上，但是过了4、5天还是不见ESC贴壁形成克隆。不知道是什么原因。nanog前辈请指教。谢谢先。
我是参考PANS上 2006的一片文章Self-renewal of embryonic stem cells by a small molecule配制培养基的，这和ying的配方是不是不一样啊，ying配方的原文我下不到。nonog前辈又说培养基不是关键，问题出在哪里呢？
hanfuzjfc wrote:
先用经典的血清培养ESC在MEF上形成克隆后消化离心用ying的无血清培养基N2B27重悬浮，先接种到没有明胶包被的dish上，培养1小时，目的去处MEF，之后将未贴壁的ESC转移到明胶包被的dish上，但是过了4、5天还是不见ESC贴壁形成克隆。不知道是什么原因。nanog前辈请指教。谢谢先。
try to put ES/MEF on gelatinized dish in N2B27 with LIF directly
do not worry about MEF, they need serum to surive
they will die in N2B27 soon
hanfuzjfc wrote:
我是参考PANS上 2006的一片文章Self-renewal of embryonic stem cells by a small molecule配制培养基的，这和ying的配方是不是不一样啊，ying配方的原文我下不到。nonog前辈又说培养基不是关键，问题出在哪里呢？
there is no ying's original recipes in PDF file
that journal seems does not have e-version.
I doubt you removed most of ES cells at re-plating stage.
Ying's Cell paper in 2003 set this reference. Now I post it here. It's from Methods in Enzymology.
ions for Neural Commitment and Differentiation.pdf (162.4k)
谢谢nanog前辈的指教，谢谢liwa_ear贴的文章，谢谢你们，我再去试试～再次谢谢前辈们！
