一、基本原理

紫外——可见分光光度法：是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。操作简单、准确度高、重现性好。

波长长（频率小）的光线能量小，波长短（频率大）的光线能量大。

100nm 200nm 400nm 800nm 400um 1m

通指

X-射线 紫外区 可见区 红外区 微波区 无线电波区

Beer-lambert定律： A=E l c A——吸收度 E-吸收系数 l ——液层厚度 c——溶液浓度

吸收度浓度与厚度的关系。是吸收光度法的基本定律，重要前提是单色光。

摩尔吸收系数：指在一定波长下，溶液浓度为1mol/L ， 厚度为1cm时的吸收度，用 表示。

百分吸收系数：指在一定波长下，溶液浓度为1%（W/V） ， 厚度为1cm时的吸收度，用 表示。

影响Beer定律因素：化学因素，光学因素

二、紫外——可见分光光度计： 主要部件：医学教育;网 //www.med66.com

1、光源：要求光谱的光源，氢灯和钨灯（350nm）

2、单色器：进口狭缝、准直镜、色散元件（棱镜和光栅）、聚焦透镜和出口狭缝组成。

3、吸收池：用光学玻璃制成的吸收池，只能用于可见光区。用熔融石英（氧化硅），可见紫外光区。

4、检测器：光电池：（硒光电池：用于可见光；硅光电池：紫外可见光） 内阻小，易疲劳。

光电管：内阻高，电流易放大 .

5、讯号处理和显示器

三、定性与定量方法：医学教l育网 //www.med66.com

（一）、定性鉴别：是多数有机化合物具有吸收光谱特征。一般用对比法。

1、对比吸收光谱特征数据

2、对比吸收度（或吸收系数）比值

3、对比吸收光谱的一致性

（二）、纯度检查：杂质检查与杂质限量检测

（三）、含量测定：

1、吸收系数法

2、标准曲线法

3、对照法

第二节 荧光分析法

荧光分析法：利用荧光的物理特性而进行定性与定量测定的方法。医学教育网　收集整理荧光法比紫外可见灵敏。

荧光光度计：激发光源、样品池、检测器、滤光片和单色器。

第三节 红外分光光度计

红外线：波长大于0.76um，小于500um的电磁波。 Hooke定律来描述分子的伸缩振动。

当分子的振动频率与入射的红外频率相同时，分子对红外产生吸收。伸缩振动和弯曲振动。

基频峰：分子吸收一定频率的红外线，振动能级由基态（V=0）跃迁至第一激发态时产生的吸收峰。

倍频峰：振动能级由基态跃至第二、三激发态。统称泛频峰。

吸收峰：用于鉴别官能团存在的吸收峰称特征吸收峰。

指纹区：1250-400cm （8.0-25um）的低频区称为指纹区。医学教w育网 //www.med66.com

红外分光光度计主要部件：光源、吸收池、单色器（棱镜和光栅）和检测器（真空热电偶）及记录装置。